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科研服務

火影忍者博人传忍者先锋:TA克隆

火影忍者剧场版忍者之路 www.vjqvb.icu 一.DNA克隆簡介

DNA克隆是基因工程研究中最基本的操作之一。簡單地講,就是將外源基因與克隆載體進行體外連接,然后再轉化到宿主菌中進行克隆、篩選,以此獲得質粒重組體。 

 

二.服務要求

1. 提供外源DNA的來源及背景資料。DNA來源包括:PCR擴增產物,RT-PCR擴增產物,從其他質粒上酶切得到的DNA片段等。 

2. 如DNA為PCR產物,請提供DNA片段的電泳照片,并請標明Marker及其濃度。  

3. 注明克隆使用的酶切位點。 

4. 如果為商品化載體,請提供生產廠家及標準名稱,如果所提供載體是您構建的,請注明多克隆位點、抗性、分子量等資料。 

5. 實驗中使用氨芐、青霉素、卡那霉素、四環素以外的抗生素時,抗生素需您提供。 

6. 您自己提供的引物如果為干品,請標明具體的OD數,如果為液體狀態,請標明具體濃度。 

7. 可用甘油菌和穿刺菌的形式郵寄菌體(最好同時提供相應質粒),如果提供質粒則質粒的量最好在4μg以上;如果提供的是PCR產物,則PCR產物量最好在5μg以上(最好附有電泳照片)。

 

三.操作程序

1. 通過代理商或直接和公司聯系,同時提供詳細的背景資料,實驗要求等。代理商或公司經過研討后將和您取得聯系,協商確定實驗方案,并告知您具體的服務價格,我們將簽訂合同,在收到您試驗材料后,立即開始實驗。 

2. 如果您需要我們進行PCR擴增時,我們會采用高保真DNA聚合酶進行PCR反應,但不承諾測序結果與參考序列完全一致。

3. 如果克隆后的質粒需要測序反應,請將標準參考序列的電子版資料提供給我們。 

4. 在完成DNA克隆和測序等工作后,我們將為您提供一套完整的實驗結果,其中包括:實驗操作說明、引物、克隆構建的質粒及含該質粒的菌體(穿刺菌)、測序結果堿基序列圖和測序彩色峰形圖。 

5. 一般情況下普通載體的克隆需10天左右時間。

 

四.收費標準

1. 普通載體(如pUC系列、pBluescript ll系列、T載體系列、pGEM系列等)與其他特殊載體(如pET系列、pGEX系列、pLNCX 系列、pQE系列、pBR系列等)在克隆時難易程度相差很大,不同的DNA片段的克隆情況也各不相同,因此DNA片段的克隆服務收費標準不一樣。一般來說,單就克隆操作這一步驟而言的收費標準在600~1500之間,具體情況請詢價。  

2. 多表達框、多拷貝數質粒構建過程相對復雜,具體收費標準請與公司基因工程師直接談。

 

五.克隆服務的種類

1、PCR產物的TA克隆。 

2、PCR產物克隆到非T載體。

3、注明克隆使用的酶切位點以及是否需要平端連接等。

4、各種載體中元件的修改。

5、原核、真核表達載體的構建。